PCR-LFA

Papers Feed를 하는데 최근에 재미있어 보이는 technique으로 실험 한 논문이 있어서 정리해 두려고 한다. 

<PCR combined with lateral flow assay>

간단하게 3장의 사진으로 모든게 설명이 가능한데,

 

Fig. 1

Forward primer랑, reverse primer를 각각 FITC or Biotin이 label 되도록 design 한다.

우리가 원하는 target template가 있으면, FITC와 Biotin 둘다 가지는 PCR product가 만들어 지게 될 것이다. 그럼 이 녀석을 어떻게 detection 할 것인가? 

마치 임신 테스트기 같은데, 임신 테스트기는 임신시 여성의 소변에 증가하는 호르몬을 잡아 주어 표시하는 거지만,

이 경우는 label된 DNA를 항원 항체로 잡아 준다고 보면 된다. 

 

Fig. 2                                                                                                                                     Fig. 3

 

FITC를 잡아주는 항체를 conjugate pad에 두고, 

test line에는 Biotin과 결합하는 streptavidin을 분포 시키고,  

Control line에는 FITC를 잡아주는 항체를 두고 

발색제도 종이 패드에 같이 있는것 같다.

 

왼쪽 sample pad에 샘플을 넣어주면, 다른 젖지 않은 쪽으로 샘플이 흐르게 되는데, 

label된 DNA가 있는경우 conjugate pad에서 

FITC 결합 항체와 붙게 되고, 이게 test line에서 Biotin과 결합하는

Streptavidin과 결합하여 붙게 된다. 

만약에 label된 DNA가 없으면 conjugate pad에 있는 항체는 그냥 흐르다 control line에 붙게 될테다. 

 

실제 사진을 보면 그냥 종이 쪼가리에 선이 생겼네 안생겼네로 원하는 DNA가 있나 없나를 볼 수 있다.

 

이런걸 보면 아주 심플하게 현장에서 질병 진단을 할 수 있을 것 같은데, 

PCR을 할때, isothermal amplification이 가능하면 더욱 현장 활용도가 높아 질 것 같다.

분자생물학의 발전속도는 참 빠르네

 

 

Reference

Fig. 1, 3

Seo, Haneul, et al. "Rapid diagnosis of two marine viruses, red sea bream iridovirus and viral hemorrhagic septicemia virus by PCR combined with lateral flow assay." VirusDisease (2020): 1-6.

Fig. 2

Zhao, Liangjuan, et al. "A PCR-based lateral flow assay for the detection of Turkey ingredient in food products." Food Control 107 (2020): 106774.