Transformation efficiency2 Transformation 의 효율을 계산 해보자. Transformation efficiency는 어떻게 계산하는 건가? 내가 만든 competent cell이 효율이 얼마 정도 될까? 아니면 A 컴셀과 B 컴셀의 TF 효율은 얼마나 차이날까? 이럴때 TF 효율을 계산하면 된다. 보통의 경우 많이 사용하는 puc18과 같은 vector를 가지고 기준을 잡아도 되고 아니면 실험실에 넘쳐나는 vector를 가지고 계산을 해도 무방하다. 하지만 A 컴셀에는 C vector B 컴셀에는 D vector를 TF하면 안되겠죠? vector의 크기에 따라서 TF 효율의 차이가 있으니까. TF할 때 heat shock을 하면, 컴셀 50ul에 vector 1ul on ice 30m 42℃ 1m 30s on ice 2m SOC 800ul 넣고 1h 30m 37℃ 쉐이킹.. 2020. 2. 9. 효율 좋은 Competent cell 직접 만들어 쓰자. 제목 그대로 효율 좋은 컴셀을 만들어 쓰자. 혹시 컴셀을 싸서 쓰는가? 아니면 DH5ɑ로 컴셀을 만들 때 CaCl2 방법을 쓰는가? 만약에 그렇다면 글을 읽고 꼭 한번만 test 해보시길.. Bric에 들어가면 간간히 ligation이 안되요. vector가 안만들어져요. 와 같은 아우성들이 보인다. 물론 여러 변수가 있겠지만, 낮은 컴셀의 효율이 아마 가장 큰 원인으로 생각된다. 이번에 소개할 방법은 INOUE method, ultracompetent cell 이라는 이름으로 불리는 것이다. 이 방법의 핵심은 낮은 온도에서 오래 오래 culture하는 것. DH5a, XL1-blue, DB3.1, JM109등의 균주에서 높은 효율을 보인다 (1x10^7이상) BL-21 이랑 그 유사 친구들에서는 효율이.. 2020. 2. 9. 이전 1 다음
