실험실/실험(Experiments)17 Transformation 의 효율을 계산 해보자. Transformation efficiency는 어떻게 계산하는 건가? 내가 만든 competent cell이 효율이 얼마 정도 될까? 아니면 A 컴셀과 B 컴셀의 TF 효율은 얼마나 차이날까? 이럴때 TF 효율을 계산하면 된다. 보통의 경우 많이 사용하는 puc18과 같은 vector를 가지고 기준을 잡아도 되고 아니면 실험실에 넘쳐나는 vector를 가지고 계산을 해도 무방하다. 하지만 A 컴셀에는 C vector B 컴셀에는 D vector를 TF하면 안되겠죠? vector의 크기에 따라서 TF 효율의 차이가 있으니까. TF할 때 heat shock을 하면, 컴셀 50ul에 vector 1ul on ice 30m 42℃ 1m 30s on ice 2m SOC 800ul 넣고 1h 30m 37℃ 쉐이킹.. 2020. 2. 9. 효율 좋은 Competent cell 직접 만들어 쓰자. 제목 그대로 효율 좋은 컴셀을 만들어 쓰자. 혹시 컴셀을 싸서 쓰는가? 아니면 DH5ɑ로 컴셀을 만들 때 CaCl2 방법을 쓰는가? 만약에 그렇다면 글을 읽고 꼭 한번만 test 해보시길.. Bric에 들어가면 간간히 ligation이 안되요. vector가 안만들어져요. 와 같은 아우성들이 보인다. 물론 여러 변수가 있겠지만, 낮은 컴셀의 효율이 아마 가장 큰 원인으로 생각된다. 이번에 소개할 방법은 INOUE method, ultracompetent cell 이라는 이름으로 불리는 것이다. 이 방법의 핵심은 낮은 온도에서 오래 오래 culture하는 것. DH5a, XL1-blue, DB3.1, JM109등의 균주에서 높은 효율을 보인다 (1x10^7이상) BL-21 이랑 그 유사 친구들에서는 효율이.. 2020. 2. 9. Dual-Glo luciferase assay. Dual-Glo luciferase assay는 Transfection efficiency를 보정하면서 reporting을 할 수 있는 system이다. 예를 들어, A cell line에 A vector를 동일한 방법으로 transfection 한다고 하더라도, 반복구 마다, vector가 cell에 들어가는 효율이 어느 정도 차이를 보이기 때문에 그 차이를 최소화시키기 위해 fire fly와 Renillia라는 2개의 reporting을 통해 값을 보정할 수 있는 방법이다. 특히나 transfection efficiency가 낮은 cell line에서는 그 차이를 보기 힘들 수도 있고, 한개를 reporting 하는 것보다 훨씬 정확한 data를 낼 수 있다. 나의 경우에는 promega의 Dual-.. 2020. 1. 20. 스마트 실험실로 가는 지름길 Quartzy https://www.quartzy.com Quartzy | The free and easy way to manage your lab Quartzy is the world's #1 lab management software for life science companies. Manage inventory, track lab supply orders, and buy everything, all in one place. www.quartzy.com 실험실이라는 공간은 수많은 선임 연구자들의 연구 기반을 바탕 속에 새로운 연구가 이루어지는 곳이다. 실험실의 역사가 깊으면 깊을 수록, 냉동고나 창고에서 뜻하지 못한 보물? 또는 처리해야 할 쓰레기들이 발견된다. 더군다나 분자 생물학 실험을 기반으로 하는 실험공간에.. 2019. 12. 25. 이전 1 2 3 4 5 다음
